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    Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(P1041-P1042-P1043-P1044)

    促销: 380.00~19000.00
    运费 ¥0.00
    P1041(250U) P1042(1000U) P1043(3000U) P1044(18000U)

    Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶

    Cat. #P1041,P1042,P1043,P1044

    产品简介

    东盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一种创新型的化学修饰热启动酶,该酶在室温下活性被完全封闭,依赖温度激活酶活性,可有效减少非特异性扩增,具有非常高的特异性。扩增片段长度可达5 kb(简单模板)。延伸速率为2min/kb70-75℃,简单模板可达20s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先进的化学修饰技术生产,动物源性DNA污染为零,稳定性更强,具有抗体法热启动酶不可比拟的优势。同时,预变性时间缩短至3分钟,工作效率比大多数化学修饰法热启动酶更高,是一款非常新颖、实用的产品。

    产品组成

    Component

    P1041

    250U

    P1042

    1,000U

    P1043

    3,000U

    P1044

    18,000U

    Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl

    50 μl

    200 μl

    200 μl × 3

    100 μl× 36

    10× Hotstart BufferMg2+ Plus[1]

    1.25 ml

    1.25 ml× 2

    1.25 ml × 6

    1.25 ml × 36

    6× Loading Buffer[2]

    1 ml

    1 ml

    1 ml

    -

    [1] 10× Hotstart Buffer分为Mg2+ PlusMg2+ Free两种包装,可方便选择。如无特别说明提供Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free10× Hotstart Buffer提供25 mM MgCl2。

    [2] P1044不含6× Loading Buffer,如有需要请单独购买(Cat. #M9041)。

    本产品不含dNTPs,如有需要请单独购买(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

    活性定义

    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

    保存条件

    -20℃保存2年。

    质量控制

    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

    功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

    应用举例

    1. 配制反应体系

    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

    Ordinal

    Component

    Volume

    (50 μl reaction volume)

    Final   concentration

    (50 μl reaction volume)

    1

    10× Hotstart BufferMg2+ Plus

    5 μl

    2

    dNTPs2.5mM

    4 μl

    0.4 mM

    3

    upstream primer (10 μM)[1]

    2 μl

    0.4 μM

    4

    downstream primer (10 μM)[1]

    2 μl

    0.4 μM

    5

    Optimus? Hotstart Taq   DNA聚合酶(5U/μl[2]

    0.5 μl-1 μl

    2.5U-5U

    6

    template DNA[3]

    1-4 μl

    <1μg

    7

    超纯水[4]

    To 50 μl

    -

    optional

    MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]

    Variable

    -

    [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

    [2] 根据目的片段扩增的难易程度调整DNA聚合酶的用量。

    [3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

    Template

    Dosage

    人类基因组DNA

    0.1μg-1μg

    λDNA

    0.5ng-5ng

    大肠杆菌基因组DNA

    10ng-100ng

    质粒DNA

    0.1ng-10ng

    [4] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

    [5] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

    2. 设定反应程序进行PCR反应

    Stage

    Temperature

    Time

    Number of Cycles

    Initial Denaturation

    94℃

    3 min

    1

    Denaturation

    94℃

    30 sec

    25-35

    Annealing

    55-68℃[1]

    30 sec

    Extension

    72℃

    Variable[2]

    Final Extension

    72℃

    5-10 min

    1

    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

    [2] 延伸时间按2min/kb来设最佳(简单模板可达20s/kb)。

    3. 分析结果

    将产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

    无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

    操作注意事项

    1 本产品采用改进的化学修饰技术,依赖温度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特异性结合,可在室温下配置反应体系。

    2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通?;峒由?/span>1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

    引物设计注意事项

    引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

    相关产品

    名称

    货号

    规格

    PCR Mix

    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    Power Green qPCR Mix

    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    1kb ladder

    M1181/M1182

    50/250

    DSTM5000

    M1111/M1112

    60/300

    高纯度质粒小提试剂盒

    N1011/N1012/N1013

    50/100/200

    通用RNA提取试剂盒

    R1051

    50

    基因组DNA快速提取试剂盒

    N1111/N1112

    50/100

    DNA凝胶回收试剂盒

    N1071/N1072/N1073

    50/100/200

    RT-PCR Kit

    R1011/R1012

    20/100

    更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

     

     


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