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    PCR Mix(P2011-P2012-P2013-P2014-P2015)

    促销: 120.00~4500.00
    运费 ¥0.00
    P2011(1 ml) P2012(5 ml) P2013(10ml) P2014(50ml) P2015(100ml)

    PCR Mix

    Cat. #P2011,P2012,P2013,P2014,P2015

    产品简介

    PCR Mix浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端,可直接用于TA克隆。

    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为1min/kb70-75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。

    产品组成

    Component

    P2011

    P2012

    P2013

    P2014

    P2015

    2× PCR Mix

    1 ml

    1 ml× 5

    1 ml× 10

    1 ml× 50

    1 ml× 100

    超纯水

    1 ml

    1 ml× 5

    -

    -

    -

    本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

    保存条件

    -20℃保存2年。

    质量控制

    纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

    功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

    应用举例

    1. 配制反应体系

    请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

    Ordinal

    Component

    Volume

    (50 μl reaction volume)

    Final   concentration

    (50 μl reaction volume)

    1

    2× PCR Mix

    25   μl

    2

    upstream   primer (10 μM)[1]

    2 μl

    0.4   μM

    3

    downstream   primer (10 μM)[1]

    2 μl

    0.4   μM

    4

    template   DNA[2]

    1-4   μl

    <1μg

    5

    超纯水[3]

    To   50 μl

    -

    optional

    MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

    Variable

    -

    [1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

    [2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

    Template

    人类基因组DNA

    λDNA

    大肠杆菌基因组DNA

    质粒DNA

    Dosage

    0.1μg-1μg

    0.5ng-5ng

    10ng-100ng

    0.1ng-10ng

    [3] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

    [4] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

    2. 设定反应程序进行PCR反应

    Stage  

    Temperature

    Time

    Number   of Cycles

    Initial   Denaturation

    94℃

    3   min

    1

    Denaturation

    94℃

    30   sec

    25-35  

    Annealing

    55-68℃[1]

    30   sec

    Extension

    72℃

    Variable[2]

    Final   Extension

    72℃

    5-10   min

    1

    [1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

    [2] 延伸时间按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。

    3. 分析结果

    反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

    无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

    操作注意事项

    1 室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA。

    2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通?;峒由?/span>1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

    3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。

    引物设计注意事项

    引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

    相关产品

    名称

    货号

    规格

    PCR Mix

    P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    Power Green qPCR Mix

    P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

    1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

    1kb ladder

    M1181/M1182

    50/250

    DSTM5000

    M1111/M1112

    60/300

    高纯度质粒小提试剂盒

    N1011/N1012/N1013

    50/100/200

    通用RNA提取试剂盒

    R1051

    50

    基因组DNA快速提取试剂盒

    N1111/N1112

    50/100

    DNA凝胶回收试剂盒

    N1071/N1072/N1073

    50/100/200

    RT-PCR Kit

    R1011/R1012

    20/100

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